細(xì)菌死活染色試劑盒(DMAO/PI)，即LIVE/DEAD Bacterial Staining Kit with DMAO & PI，或LIVE/DEAD Bacterial Viability Kit with DMAO and PI，也稱細(xì)菌活力檢測(cè)試劑盒(Bacterial Viability Assay Kit)或細(xì)菌毒性檢測(cè)試劑盒(Bacterial Cytotoxicity Assay Kit)，是一種高效、便捷、靈敏的基于DNA綠色熒光染料DMAO和紅色熒光染料碘化丙啶(Propidium iodide, PI)的雙熒光染色法檢測(cè)細(xì)菌死活的試劑盒。本試劑盒檢測(cè)時(shí)，活細(xì)菌呈現(xiàn)綠色熒光，死細(xì)菌呈現(xiàn)綠色和紅色兩種熒光。本試劑盒可使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等熒光檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。

DMAO，即N, N-dimethylaniline N-oxide，是一種核酸綠色熒光染料，對(duì)于革蘭氏陽(yáng)性和陰性細(xì)菌均適用，且既能染色活細(xì)菌，也能染色死細(xì)菌。該染料具有膜通透性，能透過(guò)細(xì)胞膜，優(yōu)先結(jié)合雙鏈DNA。DMAO非常穩(wěn)定，在室溫下進(jìn)行常規(guī)操作和保存不易降解。PI是一種非滲透性熒光染料，不能穿過(guò)具有生物活性的細(xì)胞質(zhì)膜，因此對(duì)于具有完整細(xì)胞膜的細(xì)菌不能染色。而對(duì)于壞死細(xì)菌，其細(xì)胞膜的完整性喪失，PI可進(jìn)入細(xì)胞核并與雙鏈DNA結(jié)合，并嵌入細(xì)菌的DNA雙螺旋形成PI-DNA復(fù)合物從而產(chǎn)生紅色熒光，這種結(jié)合很少或幾乎沒(méi)有序列偏好，每4-5個(gè)堿基對(duì)插入一分子PI染料。將DMAO與PI聯(lián)合使用檢測(cè)細(xì)菌的死活，具有完整細(xì)胞膜的活細(xì)菌呈現(xiàn)綠色熒光，細(xì)胞膜受損的死細(xì)菌同時(shí)呈現(xiàn)綠色與紅色熒光。

DMAO-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)光波長(zhǎng)為503nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為530nm；PI-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)光波長(zhǎng)為535nm，最大發(fā)射光波長(zhǎng)為617nm。DMAO-DNA和PI-DNA的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考圖1，可分別使用FITC和Cy3通道觀察。

本試劑盒提供的DMAO與PI均為1000X的儲(chǔ)存液，溶液經(jīng)過(guò)優(yōu)化，對(duì)大多數(shù)細(xì)菌都適用，但為了獲得更滿意的結(jié)果，對(duì)于不同類型的細(xì)菌請(qǐng)自行進(jìn)行一定的濃度摸索，DMAO和PI的使用終濃度一般為0.5-2X，優(yōu)先的推薦終濃度為1X。同時(shí)，本試劑盒提供檢測(cè)緩沖液，該緩沖液可用于細(xì)菌死活染色工作液的配制。

保存條件：

-20ºC保存，一年有效。其中DMAO (1000X)和PI (1000X)須避光保存。

注意事項(xiàng)：

細(xì)菌染色前應(yīng)去除培養(yǎng)基，培養(yǎng)基內(nèi)的組分會(huì)結(jié)合DMAO與PI染料，使染色效率降低。

熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

初次使用時(shí)DMAO (1000X)和PI (1000X)可適當(dāng)分裝后-20ºC保存，以避免反復(fù)凍融。

檢測(cè)緩沖液經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌處理，在使用時(shí)須注意避免微生物污染，否則很可能嚴(yán)重影響染色效果。如果檢測(cè)緩沖液發(fā)生渾濁等明顯的微生物污染，就不能繼續(xù)使用。

熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)時(shí)須使用適合熒光檢測(cè)的黑板或白板

注意事項(xiàng)：

本產(chǎn)品僅限科研用途。